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NGS Library Preparation & Sequencing

Preparación de bibliotecas y secuenciación NGS

Selecciona la muestra y el flujo de secuenciación, y organiza el control de entrada, la preparación de biblioteca, la amplificación o limpieza, el control final y la transferencia.

Protocolo inicial editable

5 protocolos iniciales ligados a la fuente

¿Qué hace este protocolo?

Los protocolos de DNA, mRNA, amplicón 16S, ligación de lectura larga y célula única conservan sus propias condiciones verificadas. No extrapoles un valor de un kit o plataforma a otra.

Alcance compatible

  • • Short-read DNA
  • • Stranded mRNA
  • • 16S amplicon
  • • Nanopore ligation
  • • Single-cell 3'

Límites de aplicación

Las condiciones permanecen ligadas a la fuente y a la revisión verificadas. No se mezclan valores entre kits, instrumentos, rutas o perfiles distintos ni se declara un éxito experimental universal.

PRT-NGS-STARTER-DNA-PREP-001Short-read DNA

Illumina DNA Prep: de ADN genómico a biblioteca indexada de lecturas cortas

NGS Library Preparation & Sequencing · CURATED-PRT-NGS-STARTER-DNA-PREP-001-V1

Guía oficial revisada
ORDERED_STEPSKIT_VERSION_LOCKEDINDEX_UNIQUENESS_REQUIREDCONTROL_GATEDMANUFACTURER_IFU_OVERRIDES

Completa primero los datos de tu ensayo

Introduce tus secuencias y condiciones reales. No se inventan valores que la fuente no indique.

1

FIJAR EL DISEÑO DE LA CORRIDA

Registre identificadores de muestras, tamaño del genoma, profundidad, longitud paired-end, conjunto de índices y secuenciador compatible antes de abrir los reactivos.

Condition: REQUERIDO POR EL USUARIO: confirme número de muestras, pares de índices únicos, cobertura y compatibilidad del kit/instrumento.
2

CALIFICAR LA ENTRADA DE ADN

Cuantifique el ADN con un ensayo fluorométrico validado y evalúe pureza e integridad con métodos apropiados para la muestra.

Reagent: ADN genómico purificado en buffer compatible con transposiciónCondition: Use la guía vigente para masa, volumen y excepciones; la absorbancia por sí sola no demuestra aceptación.
3

PREPARAR LOS REACTIVOS

Lleve el transposoma unido a perlas y los reactivos de tagmentación al estado indicado por la guía vigente, mezclando sin dañar las perlas.

Temperature: Use the storage and handling temperatures in the current product documentation.Condition: Conserve lote, caducidad, número de descongelaciones y mapa de placa en el registro.
4

TAGMENTAR EL ADN

Combine ADN calificado con la reacción de transposoma unido a perlas y ejecute el programa definido por el kit para fragmentar y etiquetar el ADN.

Duration: 15 minutos como punto de partida descrito; prevalece el tiempo de la revisión vigente.Temperature: Use the exact current thermal-cycler program for the kit revision.Reagent: Componentes de transposoma y tagmentación Illumina DNA Prep
5

DETENER Y LAVAR

Detenga la tagmentación y lave la biblioteca unida a perlas en el orden prescrito, manteniendo las perlas suspendidas y evitando transferencias entre pocillos.

Reagent: Buffers de parada y lavado del kitCondition: No sustituya buffers ni omita lavados.
6

INDEXAR Y AMPLIFICAR

Añada un par de índices duales únicos a cada muestra y realice la PCR de ciclos limitados especificada para la entrada de ADN medida.

Temperature: Use the kit revision and input-dependent PCR program.Reagent: Mezcla PCR y adaptadores de índice i5/i7 compatiblesCondition: REQUERIDO POR EL USUARIO: verifique que no se repita ningún par de índices.
7

LIMPIAR LAS BIBLIOTECAS

Realice limpieza con perlas, lavados con etanol, secado y elución sin alterar el pellet ni secar en exceso las perlas.

Duration: Use the magnet, wash, dry, and elution times in the current guide.Reagent: Perlas de purificación, etanol recién preparado y buffer de resuspensión del kit
8

CONTROL DE CALIDAD Y CUANTIFICACIÓN

Mida concentración final y distribución de tamaños, y busque bibliotecas fallidas o dímeros de adaptadores antes del pooling.

Condition: Registre método, concentración, tamaño medio y decisión de aceptación para cada biblioteca.
9

NORMALIZAR Y AGRUPAR

Normalice las bibliotecas aprobadas a la molaridad elegida y agrupe solo combinaciones de índices verificadas según el diseño de corrida.

Reagent: Bibliotecas indexadas aprobadas y buffer de resuspensión compatibleCondition: REQUERIDO POR EL USUARIO: calcule la contribución de cada biblioteca y documente exclusiones o rebalanceos.
10

SECUENCIAR Y REVISAR

Desnaturalice, diluya y cargue el pool según la guía del instrumento compatible; revise métricas de corrida y calidad FASTQ antes de interpretar.

Condition: La concentración de carga y los umbrales de calidad deben proceder de la documentación vigente del sistema.