Se observa una supresión de la expresión de antígenos de vacunas multivalentes de ARNm en ensayos celulares de potencia
Interferencia en la expresión de antígenos en vacunas multivalentes de ARNm
En un ensayo de potencia con células humanas se observó una menor expresión de antígenos con formulaciones multivalentes de ARNm que con formulaciones monovalentes de dosis equivalente. Las vacunas de ARN mensajero (ARNm) se utilizan para prevenir enfermedades infecciosas, pero también es necesario considerar vacunas multivalentes y combinadas que incluyan varios antígenos para responder a la diversidad viral. La posibilidad de que distintos ARNm interfieran entre sí en la traducción de sus proteínas diana al combinarse también debe examinarse en la evaluación de la calidad. En este contexto, la potencia se refiere a la actividad biológica evaluada en un ensayo celular y se distingue de la protección frente a la infección en personas.
Supresión de la expresión confirmada mediante espectrometría de masas y análisis con anticuerpos
El equipo introdujo ARNm en células humanas y analizó las proteínas antigénicas mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). En las formulaciones multivalentes, la traducción de las proteínas antigénicas se redujo en comparación con las formulaciones monovalentes de dosis equivalente. El Western blot y la inmunotinción intracelular con anticuerpos específicos de tipo también confirmaron la supresión de la expresión.
En el mismo ensayo, los datos proteómicos obtenidos por LC-MS/MS sin preparación adicional de las muestras también mostraron respuestas de las células huésped. Las células que recibieron una dosis alta de ARNm presentaron cambios proteómicos que sugerían una reducción de la capacidad global de traducción. Sin embargo, estos resultados por sí solos no permiten afirmar que se haya esclarecido el mecanismo molecular concreto de la supresión de la expresión. El resumen proporcionado no indica la línea celular, los tipos de antígeno, las dosis de ARNm, el porcentaje de reducción de la expresión ni los valores estadísticos; por ello, es difícil determinar la magnitud y el alcance de la supresión.
Evaluación de potencia y revisión de dosis para formulaciones multivalentes
El estudio mostró que la LC-MS/MS podría servir como alternativa para realizar ensayos de potencia sin depender de anticuerpos. Esto no significa que se haya cuantificado la eficacia protectora clínica de una vacuna; los resultados se refieren a un método para evaluar las proteínas antigénicas producidas en células.
El equipo propuso diseñar cuidadosamente los ensayos celulares al evaluar formulaciones multivalentes de ARNm y considerar materiales de referencia adecuados para ellas, junto con la optimización de las dosis de ARNm. Comprobar si los resultados de expresión obtenidos con una formulación monovalente se mantienen en una multivalente se plantea así como una tarea para la evaluación de la calidad. Estos resultados del ensayo celular, por sí solos, no permiten determinar cambios en la respuesta inmunitaria de las personas vacunadas ni en la seguridad o la eficacia protectora de la vacuna.
Fuente: Resumen del artículo en Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis
Messenger RNA (mRNA) vaccines are highly effective against infectious diseases, but viral diversity has underscored the necessity for multivalent and combination vaccines. We hypothesize there could be interference of target protein translation in multivalent mRNA vaccines in cell-based assays used for potency testing. Following transfection into human cells, we observed that antigen protein translation is inhibited in multivalent formulations compared to their dose-matched monovalent counterparts using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Inhibited expression was further validated using Western blot and intra-cellular immunostaining with type-specific antibodies. Beyond direct antigen-specific analysis, LC-MS/MS proteomics data from the same assay without additional sample preparation provided a broad view of host cell responses, revealing proteome-level changes indicative of impaired global translation capacity in cells transfected with high dose mRNA(s). To the best of our knowledge, we report for the first time in literature that antagonistic interactions among mRNA constructs can reduce protein expression in multivalent drug products. Our study also demonstrates that LC-MS/MS is a viable alternative for potency testing without dependence on antibodies. These findings highlight the need for careful cell-based assay design, multivalent drug product reference standards for potency assessment, and deliberate mRNA dose optimization in multivalent formulations.
Los desarrolladores de vacunas multivalentes de ARNm pueden comparar los resultados de las pruebas de cada ARNm por separado con la expresión de antígenos en la formulación final combinada para revisar las condiciones de evaluación de la calidad. Por ejemplo, si la expresión antigénica difiere entre formulaciones monovalentes y multivalentes de dosis equivalente, pueden considerar materiales de referencia y condiciones de ensayo adecuados para la formulación multivalente, ajustar las dosis de ARNm y comparar los cambios en la expresión. La LC-MS/MS se propuso como una alternativa para evaluar la potencia sin depender de anticuerpos. Sin embargo, el resumen proporcionado por sí solo no permite establecer las dosis óptimas ni los criterios de ensayo para productos concretos, y estas evaluaciones tampoco demuestran mejoras en la seguridad clínica o la eficacia protectora.