Ligation 계산기 — Vector와 insert의 길이(bp)·농도(ng/µL) 및 목표 molar ratio를 입력하면 T4 ligase 반응에 필요한 insert 양(ng) 및 부피(µL)를 자동 산출합니다. 공식: Insert(ng) = Vector(ng) × ratio × (Insert_bp / Vector_bp).

(1) 표준 cloning (restriction digestion + ligation) 반응 setup (2) 다양한 insert:vector molar ratio 테스트 (1:1, 3:1, 5:1, 10:1) (3) Blunt-end ligation 시 더 높은 ratio(5~10:1) 적용 (4) Sticky-end ligation 표준 ratio(3:1) 적용

① Vector 정보 • Vector length (bp, 예: pUC19 = 2686 bp) • Vector concentration (ng/µL) • Vector amount to use (ng, 보통 50~100 ng) ② Insert 정보 • Insert length (bp) • Insert concentration (ng/µL) ③ Molar ratio 선택 (1:1, 3:1, 5:1, 10:1 등) ④ 결과: Insert ng/µL 산출 + 권장 ligation mix recipe (T4 ligase 1 µL, 10× buffer 1~2 µL, total 10~20 µL)

예) pUC19 (2686 bp, 50 ng/µL) + GFP insert (720 bp, 20 ng/µL), molar ratio 3:1 → Vector 50 ng = 1 µL → Insert ng = 50 × 3 × (720/2686) = 40.2 ng → Insert µL = 40.2 / 20 = 2.0 µL → Recipe: Vector 1 µL + Insert 2 µL + 10× T4 buffer 2 µL + T4 ligase 1 µL + water 14 µL = 20 µL → 16°C overnight 또는 RT 1h