qPCR Pfaffl 계산기 — Pfaffl 방법으로 PCR 효율(E)을 반영해 상대 발현량을 정량합니다. 공식: Ratio = (E_target^ΔCt_target) / (E_ref^ΔCt_ref). 표준곡선의 기울기(slope)로 E = 10^(-1/slope)를 자동 역산합니다. 효율 100% (E=2) 가정의 단순 ΔΔCt(Livak)와 비교 출력도 제공.

(1) Target/Reference gene의 PCR 효율이 다를 때 보정된 fold-change 산출 (Livak ΔΔCt는 E=2 가정으로 편향됨) (2) Treated vs Control 샘플에서 정확한 상대 발현 비교 (3) 표준곡선 slope만 있으면 효율 자동 변환 (E=10^(-1/slope)) (4) qPCR 결과 보고용 Pfaffl/ΔΔCt 두 방식 동시 검증

① Target gene 정보 • Ct (Treated 샘플 평균) • Ct (Control 샘플 평균) • Efficiency E (1.0~2.0) 또는 표준곡선 slope 입력 ② Reference gene (GAPDH, β-actin 등) 정보 • Ct (Treated/Control 평균) • Efficiency E 또는 slope ③ 자동 출력: • Pfaffl ratio (상대 fold-change) • Livak ΔΔCt ratio (효율 100% 가정) • 두 값 비교 표준곡선 slope ≈ -3.32 → E ≈ 2.00 (효율 100%). slope ≈ -3.58 → E ≈ 1.90.

예) IL-6 발현 Treated vs Control, GAPDH 정규화 Target (IL-6): Ct_treated = 22.5, Ct_control = 25.8, slope = -3.32 → E = 2.00 Reference (GAPDH): Ct_treated = 18.4, Ct_control = 18.6, slope = -3.45 → E ≈ 1.95 ΔCt_target = 25.8 − 22.5 = 3.3 → E_target^3.3 ≈ 9.85 ΔCt_ref = 18.6 − 18.4 = 0.2 → E_ref^0.2 ≈ 1.14 → Pfaffl ratio = 9.85 / 1.14 = 8.6× upregulated → Livak ΔΔCt 2^((25.8-22.5)-(18.6-18.4)) = 2^3.1 = 8.6× (이 경우 거의 일치)